称取氯化钠，加水溶解，分装后于１２１℃高压灭菌２０分钟。供作稀释剂或冲洗剂用。
２．２ ＰＨ７．２磷酸盐缓冲液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）
磷酸氢二钠（Ｎａ2ＨＰＯ4）、１２Ｈ2Ｏ） ２５．８ｇ
磷酸二氢钠（ＮａＨ2ＰＯ4·２Ｈ2Ｏ） ４．４ｇ
蒸馏水 １０００ｍｌ
将以上成份混合，搅拌使溶，ＰＨ应为７．１～７．３，分装后于１２１℃高压灭菌２０分钟。供作稀释剂或冲洗剂用。
２．３ ＰＨ６．８磷酸盐缓冲液（０．２ｍｏｌ／Ｌ）
磷酸氢二钾液（０．２ｍｏｌ／Ｌ）：称取磷酸氢二钾２７．２ｇ，加水使溶解成１０００ｍｌ
氢氧化钠液（０．２ｍｏｌ／Ｌ）：称取氢氧化钠８．０ｇ，加水使溶解成１０００ｍｌ
取磷酸氢二钾液（０．２ｍｏｌ／Ｌ）２５０ｍｌ，加氢氧化钠液（０．２±ｍｌｏ／Ｌ）１１８ｍｌ加水稀释至１０００ｍｌ。分装后于１２１℃高压灭菌２０分钟。供作肠溶胶囊（片）剂稀释剂用。
２．４ １％吐温－８０生理盐水
于１００ｍｌ生理盐水中加入吐温－８０ １ｍｌ，分装后１２１℃高压灭菌２０分钟。供作稀释剂或冲洗剂用。
３．指示剂
３．１ ０．５％酸性复红指示剂（Ａｎｄｒａｄｅ指示剂）
３．１．１ 配制
酸性复红 ０．５ｇ
蒸馏水 １００ｍｌ
取酸性复红０．５ｇ，溶于１００ｍｌ蒸馏水中，逐渐加入氢氧化钠溶液（１ｍｏｌ／Ｌ）１６ｍｌ，每加入１滴碱液时，应将溶液充分摇匀后，再滴入第二滴，直至溶液呈草黄色。于沸水浴内保持１５分钟，静置２小时，用滤纸滤过，滤液存放在棕色瓶中，暗处保存备用。
３．１．２ 用途：可供作指示剂，变色范围ＰＨ６．０～７．４（黄～红）。
３．２ １％、０．２％、０．０２％酚红溶液（Ｐ、Ｒ）
３．２．１ 配制
酚红（Ｐｈｅｎｏｌ ｒｅｄ） １．０ｇ
蒸馏水 适量
取酚红１．０ｇ，加入氢氧化钠溶液（１ｍｏｌ／Ｌ）２．８２ｍｌ，使溶解，再加蒸馏水至１００ｍｌ，为１％酚红溶液。
量取１％酚红溶液１０ｍｌ，加蒸馏水至５０ｍｌ，混匀即得０．２％酚红溶液。
３．２．２ 用途：１％、０．２％酚红溶液均可供作培养基指示剂，变色范围ＰＨ６．８～８．４（黄～红）。０．０２％酚红溶液可供ＰＨ测定用。
３．３ ０．４％、０．０４％溴麝香草酚蓝溶液（Ｂ．Ｔ．Ｂ）
３．３．１ 配制
溴麝香草酚蓝（Ｂｒｏｎｔｈｙｍｏｌ ｂｌｕｅ） ０．４ｇ
蒸馏水 适量
取溴麝香草酚蓝０．４ｇ，加入氢氧化钠溶液（１ｍｌｏ／Ｌ）０．６４ｍｌ研磨，使溶，加蒸馏水至１００ｍｌ为０．４％溴麝香草酚蓝溶液。量取０．４％溶液１０ｍｌ，加蒸馏水至１００ｍｌ，混匀，即得０．０４％溴麝香草酚蓝溶液。
３．３．２ 用途：０．４％溴麝香草酚蓝溶液可供作培养基指示剂，变色范围ＰＨ６．０～７．６（蓝～黄），０．０４％溴麝香草酚蓝溶液可供测定ＰＨ用。
３．４ １．６％溴甲酚紫乙醇溶液
３．４．１ 配制
溴甲酚紫（Ｂｒｏｍｃｒｅｓｏｌ ｐｕｒｐｌｅ） １．６ｇ
９５％乙醇 １００ｍｌ
取溴甲酚紫１．６ｇ溶于乙醇中。
３．４．２ 用途：可供作氨基酸脱羧酶培养基指示剂，变色范围ＰＨ５．２～６．８（黄～紫）。
３．５ １％中性红溶液（Ｎ．Ｒ．）
３．５．１ 配制
中性红（Ｎｅｕｔｒａｌ ｒｅｄ） １．０ｇ
９５％乙醇 ６０ｍｌ
蒸馏水 适量
取中性红１．０ｇ，研细，加９５％乙醇６０ｍｌ，使溶后，再加蒸馏水至１００ｍｌ。
３．５．２ 用途：可供作培养基指示剂，变色范围ＰＨ６．８～８．０（红～黄）。
３．６ 美蓝氧化还原指示剂
３．６．１ 配制
（１）６％葡萄糖水溶液，取葡萄糖６．０ｇ，加蒸馏水１００ｍｌ。
（２）取氢氧化钠溶液（０．１ｍｏｌ／Ｌ）６ｍｌ，加蒸馏水至１００ｍｌ。
（３）取０．５％美蓝水溶液３ｍｌ，加蒸馏水至１００ｍｌ。
临用时等量混合上述３种溶液，装入试管煮沸，当蓝色褪为无色时，立即置于厌氧培养的容器内。
３．６．２ 用途：可供作厌氧培养时作缺氧状况的指示剂。
４．试剂
４．１ 靛基质试剂
４．１．１ 配制（两法任选其一）
（Ａ）柯凡克氏（Ｋｏｖａｃ）试剂
对二甲氨基苯甲醛 ５．０ｇ
（Ｐ－Ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅ）
戌醇（或丁醇） ７５ｍｌ
浓盐酸 ２５ｍｌ
取对二甲氨基苯甲醛５．０ｇ，加入戌醇，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸徐徐滴加，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深。此试剂应少量配制，置冰箱保存。
（Ｂ）欧－波氏（Ｅｈｒｌｉｃｈ－Ｂｏｅｈｍｅ）试剂
对二甲氨基苯甲醛 １．０ｇ
９５％乙醇 ９５ｍｌ
浓盐酸 ２０ｍｌ
取对二甲氨基苯甲醛１．０ｇ，加入９５％乙醇，充分振摇，使完全溶解，其后步骤同柯凡克氏试剂。
４．１．２ 用途：可供作靛基质反应试剂。
４．２ ０．０２％甲基红试剂
４．２．１ 配制
甲基红（Ｍｅｔｈｙｌ ｒｅｄ） ０．１ｇ
９５％乙醇 ３００ｍｌ
蒸馏水 适量
取甲基红０．１ｇ，加入９５％乙醇，使溶后，再加蒸馏水至５００ｍｌ。
４．２．２ 用途：可供作甲基红反应试剂
４．３ 培立脱氏（Ｂａｒｒｉｔｔ）试剂
４．３．１ 配制
甲液：
６％α－萘酚溶液
α－萘酚（Ａｌｐｈａ－ｎａｐｈｔｈｏｌ） ６．０ｇ
无水乙醇 １００ｍｌ
乙液：
４０％氢氧化钾溶液
氢氧化钾 ４０．０ｇ
蒸馏水 １００ｍｌ
分别将各试药溶入各溶剂中，即得。
４．３．２ 用途：可供作Ｖ－Ｐ反应的试剂
４
４．４ －－－－－虎红溶液
３０００
４．４．１ 配制
虎红（孟加拉红Ｒｏｓｅ Ｂｅｎｇａｌ，四氯四碘荧光素Ｔｅｔｒａｃｈｌ－
ｏｒｏｔｅｔｒａｉｏｄｏ－ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｄｉ ｓｏｄｉｕｍ）
０．１ｇ
蒸馏水 ７５０ｍｌ
取虎红０．１ｇ，溶于蒸馏水中。
４．４．２ 用途：可供制备霉菌培养基，用以抑制细菌及放线菌生长。
４．５ ０．１％２．３．５－氯化三苯基四氮唑（ＴＴＣ）溶液
４．５．１ 配制
２．３．５－氯化三苯基四氮唑 ０．１ｇ
（２．３．５－Ｔｒｉｐｈｅｎｙｌ Ｔｅｔｒａｙｏｌｉｕｍ Ｃｈ－
ｌｏｒｉｄｅ）
蒸馏水
取２．３．５－氯化三苯基四氮唑０．１ｇ溶于蒸馏水。
４．５．２ 用途：可供制备培养基用。
４．６ ０．１％煌绿（亮绿）溶液
４．６．１ 配制
煌绿（Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｇｒｅｅｎ） ０．１ｇ
蒸馏水 １００ｍｌ
取煌绿０．１ｇ溶于蒸馏水中
４．６．２ 用途：可供制备培养基用。煌绿溶液具抑菌作用，配制后宜在１０日内用毕，久存失效。
４．７ １％亚碲酸钠（钾）溶液
４．７．１ 配制
亚碲酸钠（钾） ０．１ｇ
蒸馏水 １００ｍｌ
取亚碲酸钠（甲）０．１ｇ，加至新鲜煮沸后冷至５０℃的热蒸馏水中，使溶。
４．７．２ 用途：可供制备培养基用，本溶液具抑菌作用，应临用现配。
４．８ ２％伊红Ｙ溶液
４．８．１ 配制
伊红Ｙ（Ｅｏｓｉｎｙ） ２．０ｇ
蒸馏水 １００ｍｌ
取伊红２．０ｇ，溶于１００ｍｌ蒸馏水中。
４．８．２ 用途：可供制备培养基用。
４．９ ０．５％美蓝溶液
４．９．１ 配制
美蓝 ０．５ｇ
蒸馏水 １００ｍｌ
取美蓝０．５ｇ溶于１００ｍｌ蒸馏水中，即成０．５％美蓝溶液。
４．９．２ 用途 供制备培养基用
４．１０ ２０％尿素无菌溶液
４．１０．１ 配制
尿素 ２０．０ｇ
蒸馏水 １００ｍｌ
取尿素２０．０ｇ，加蒸馏水１００ｍｌ，充分摇匀使溶后，用除菌器滤过，将无菌滤液置入无菌容器中即得，或将尿素溶液加入麝香草酚１ｇ，在室温放置１～２天，亦可使用。配制时须无菌操作。
４．１０．２ 用途：可供制备培养基用。
４．１１ １％盐酸二甲基对苯二胺试液
４．１１．１ 配制
称取盐酸二甲基对苯二胺（Ｄｉｍｅｔｈｙ Ｐ－Ｐｈｅｎｙｌｅｎｅ Ｄｉ－ａｍｉｎｅ Ｈｙ－ｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ， 或称对氨基二甲基苯胺盐酸盐（Ｐ－Ａｍｉｎｏ Ｄｉｍｅｔｈｙ－ｌａｎｉｌｉｎｅ Ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒ－ｉｄｅ）０．１ｇ，溶于蒸馏水１０ｍｌ即得。此液应新鲜少量配制，于冰箱内避光保存。如试液变成红褐色，不可使用。
４．１１．２ 用途 氧化酶试验用
４．１２ 盐酸试液 （１ｍｏｌ／Ｌ）
４．１２．１ 配制
量取浓盐酸（以比重１．１９，含量３６％计）８．４ｍｌ，加蒸馏水至１００ｍｌ，混匀即可。
４．１２．２ 用途 绿脓菌素测定用
４．１３ 血浆的制备
４．１３．１ 抗凝剂 ５％柠檬酸钠生理盐水，称取柠檬酸钠０．５ｇ，加入１０ｍｌ生理盐水内，１２１℃灭菌２０分钟，备用。
４．１３．２ 器材 注射器、针头、镊子、带塞试管及离心管等，经１６０℃干热灭菌２小时，备用。
４．１３．３ 采血 家兔、羊及人血均可。从家兔心脏采血时，将其固定在解剖架上，剪去左胸部心脏跳动处的兔毛，先以碘酒充分消毒，再用酒精擦去碘酒。然后将灭菌注射器装好针头，以无菌手续吸取柠檬酸钠抗凝剂约１ｍｌ，穿刺家兔左胸部的肋间抽取心脏血液约９ｍｌ轻轻混匀数分钟。待血液不凝固时，徐徐放入灭菌离心管，置离心机内，以每分钟１５００转速度离心沉淀１０分钟。用灭菌吸管仔细吸取血浆，移至灭菌试管中，置冰箱内备用。已出现凝块的血液或血浆不得供凝固酶试验用。
制备好的家兔血浆，应用已知血浆凝固酶试验阳性的金黄色葡萄球菌，按凝固酶试验法测试。经试验为阳性反应，证明血浆合格，方可用于试验。
４．１４ １％对氨基苯甲酸溶液
４．１４．１ 配制
称取对氨基苯甲酸（Ｐ－Ａｍｉｎｃ Ｂｅｎｚｏｉｃ Ａｃｉｄ）０．１ｇ，加入含１０ｍｌ蒸馏水的带塞试管中，１２１℃灭菌２０分钟，备用。
４．１４．２ 用途 供磺胺类药物检验用。
三、培养基
本方法中使用的培养基可按下列配方制备，亦可使用相应配方的干燥培养基。
１．普通肉汤培养基
１．１ 成分
牛肉浸液（１∶３） １０００ｍｌ
蛋白胨 １０ｇ
氯化钠 ５克
ＰＨ７．４
１．２ 制法 将上述成分混合，加温使溶，校正ＰＨ，煮沸，过滤。分装锥形瓶或小试管，１２１℃灭菌２０分钟。
１．３ 用途 增菌培养用
注：牛肉膏３ｇ加蒸馏水１０００ｍｌ使溶可代替牛肉浸液（１∶３）１０００ｍｌ
２．普通肉汤琼脂培养基
２．１ 成分
牛肉浸液（１∶３） １０００ｍｌ
蛋白胨 １０ｇ
氯化钠 ５ｇ
琼脂 １５～２０ｇ
ＰＨ７．４
２．２ 制法 将胨、氯化钠、加入牛肉浸液内，加热溶解，校正ＰＨ，加入琼脂，煮沸，使琼脂溶化。分装锥形瓶或试管，１２１℃灭菌２０分钟。趁热摆成斜面备用。
２．３ 用途 细菌总数测定，保存菌种及纯培养用。
注：本培养基中琼脂用量需按所用琼脂的凝固力及季节适当增减。用于测细菌总数时，琼脂量略低；用于制备斜面或平板时，其量略高。
３．半固体肉汤琼脂
３．１ 成分 同普通肉汤琼脂培养基，其中琼脂用量为０．３％～０．５％其透明度应较好。
３．２ 制法 同普通肉汤琼脂培养基。分装１３×１００ｍｍ小试管。１２１℃灭菌２０分钟。
３．３ 用途：观察细菌动力用。
４．０．００１％ＴＴＣ肉汤琼脂培养基（０．００１％２．３．５氯化三苯四氮唑琼脂）
普通肉汤琼脂培养基于用前将其融化，冷至６０℃左右加入灭菌的１％２．３．５氯化三苯四氮唑水溶液１ｍｌ，摇匀，倾注平皿。
本培养基为细菌总数测定时防止菌落蔓延用。
５．虎红琼脂培养基
５．１ 成分
蛋白胨 ５ｇ
葡萄糖 １０ｇ
磷酸二氢钾 １ｇ
硫酸镁（ＭｇＳＯ4·７Ｈ2） ０．５ｇ
琼脂 １５～２０ｇ
４／３０００虎红水溶液 １０ｍｌ
蒸馏水 １０００ｍｌ
５．２ 制法 除葡萄糖、虎红外，上述各成分混合，加热溶解，再加入葡萄糖及虎红（四氯四碘荧光素）溶液，混匀。分装锥形瓶，１１５℃灭菌３０分钟。
５．３ 用途 霉菌总数测定用
６．酵母膏胨葡萄糖（ＹＰＤ）琼脂培养基
６．１ 成分
蛋白胨 １０ｇ
葡萄糖 ２０ｇ
酵母膏 ５ｇ
琼脂 １５～２０ｇ
